医药研发人员，尤其是各大医药研发公司的动物模型，临床实验的研究人员在实验设计中，需要选择一些有疾病代表性的BioMarker，比如在特定适应症的临床实验中的使用率，学术文章中的发表情况。如能有效掌握一些大数据，将给实验设计的合理性提供了保证。
第一步：测什么Biomarker？
可以根据研究文献的数量和临床试验，比如TNF-a，在以下各大疾病的临床实验中，和对应文献中均有使用。当然在炎症，心血管疾病，糖尿病等疾病中的临床试验和使用最多。
| TNF-a在疾病中的应用(数据仅供参考) | 临床实验 | 文献数量 |
| 急性冠脉综合征 | 2 | 27 |
| 急性肾损伤 | 1 | 10 |
| 与年龄相关的记忆障碍 | 1 | 1 |
| alpha-1抗胰蛋白酶缺乏症 | 1 | - |
| 老年痴呆症病 | 1 | 5 |
| 类风湿关节炎 | 1 | 135 |
| 双相情感障碍 | 1 | - |
| 癌症,肛 | 1 | - |
| 癌、乳腺癌 | 3 | 30 |
| 癌、前列腺癌 | 1 | 15 |
| 心血管疾病 | 4 | 418 |
| 慢性肾脏疾病 | 3 | 37 |
| 慢性阻塞性肺疾病 | 3 | 23 |
| 常见的变量免疫缺陷 | 1 | 1 |
| 充血性心力衰竭 | 3 | 77 |
| 冠状动脉疾病 | 7 | 112 |
| 囊性纤维化 | 2 | 6 |
| 抑郁 | 1 | 24 |
| 糖尿病 | 9 | 100 |
| 杜氏肌营养不良症 | 1 | - |
| 移植物与宿主疾病 | 1 | 11 |
| hemophagocyticlymphohistiocytosis | 1 | - |
| 肝细胞癌 | 1 | 6 |
| 艾滋病毒感染 | 5 | 50 |
| 高血压 | 1 | 39 |
| 炎症 | 17 | 711 |
| 间质性膀胱炎 | 1 | - |
| 肝硬化 | 1 | 14 |
| 肝衰竭 | 1 | 8 |
| 多发性硬化症 | 1 | 32 |
| 肥胖 | 8 | 104 |
| 骨关节炎 | 1 | 11 |
| 骨质疏松症 | 1 | 24 |
| 胰腺炎 | 1 | 6 |
| 牙周炎 | 1 | 13 |
| 牛皮癣 | 2 | 48 |
| 呼吸窘迫综合征 | 2 | 9 |
| 硬皮病 | 1 | 3 |
| 镰状细胞病 | 2 | 4 |
| 鼻窦炎 | 1 | 1 |
| 中风 | 1 | 46 |
| 蛛网膜下腔出血 | 1 | - |
| 紧张型头痛 | 1 | - |
| 创伤 | 1 | - |
| 溃疡性结肠炎 | 3 | 13 |
| 血管炎 | 1 | 21 |
第二步：选什么试剂盒？
以TNF-a为例，MesoScaleDiscovery®Vplex电化学发光试剂盒以0.04pg/mL的灵敏度是普通ELISA（7pg/mL左右）的100多倍。如果实验样本中的TNF-a低于7pg/mL,这就意味着实验数据会无法检测，实验没有定量结论。另外一个案例，临床常规测定普通CRP的方法检测线性一般为3~200mg/L，而预测心血管事需要更高灵敏度的CRP，超敏或高敏CRP（hs-CRP）。
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| 类型 | 指标（Human） | 灵敏度（pg/mL） | 提升灵敏度（倍） | |
| 超敏Vplex | 普通ELISA | |||
| 炎症因子 | IFN-g | 0.2 | 8 | 40 |
| IL-1b | 0.04 | 1 | 25 | |
| IL-2 | 0.09 | 7 | 78 | |
| IL-4 | 0.02 | 10 | 500 | |
| IL-6 | 0.06 | 0.6 | 10 | |
| IL-8 | 0.04 | 7.5 | 188 | |
| IL-10 | 0.03 | 3.9 | 130 | |
| IL-12p70 | 0.11 | 5 | 45 | |
| IL-13 | 0.24 | 57.4 | 239 | |
| TNF-a | 0.04 | 7.1 | 178 | |
| 细胞因子 | GM-CSF | 0.14 | 3 | 21 |
| IL-1a | 0.09 | 1 | 11 | |
| IL-5 | 0.22 | 2 | 9 | |
| IL-7 | 0.16 | 5 | 31 | |
| IL-12/IL23p40 | 0.39 | 15 | 38 | |
| IL-15 | 0.17 | 2 | 12 | |
| IL-16 | 2.83 | 13.4 | 5 | |
| IL-17A | 0.74 | 15 | 20 | |
| TNF-b | 0.05 | 5.5 | 110 | |
| VEGF | 1.12 | 9 | 8 | |
| 趋化因子 | Eotaxin | 3.26 | 5 | 2 |
| MIP-1b | 0.37 | 10 | 27 | |
| Eotaxin-3 | 1.77 | 5.2 | 3 | |
| TARC | 0.22 | 7 | 32 | |
| IP-10 | 0.37 | 4.46 | 12 | |
| MIP-1a | 3.02 | 10 | 3 | |
| MCP-1 | 0.09 | 10 | 111 | |
| MDC | 1.22 | 62.5 | 51 | |
| MCP-4 | 1.69 | 7.81 | 5 | |
| 老年痴呆 | TotalTau | 1.07 | 12 | 11 |
| Abeta40 | 5.41 | 100 | 18 | |
| Abeta42 | 0.516 | 100 | 194 | |
| 血管生成 | VEGF-C | 11.1 | 48.4 | 4 |
| VEGF-D | 2.53 | 31.3 | 12 | |
| Tie-2 | 21.1 | 66 | 3 | |
| Flt-1 | 0.56 | 13.3 | 24 | |
| PIGF | 0.32 | 7 | 22 | |
| bFGF | 0.08 | 3 | 38 | |
| 血管创伤 | SAA | 10.9 | 368 | 34 |
| CRP | 1.33 | 22 | 17 | |
| VCAM-1 | 6 | 1260 | 210 | |
| ICAM-1 | 1.03 | 254 | 247 |
第三步：检测什么样本？试验周期多长？
如需要检测的是尿液，柠檬酸盐血浆样本，需在订购前仔细查看ELISA试剂盒说明书中的验证样本。简单的说，如果ELISA试剂盒是没有用过试剂盒检测尿样，柠檬酸盐血浆，使用该试剂盒检测尿样会存在极大的风险；而且很多ELISA试剂盒中还会特别说明\"不能检测柠檬酸盐血浆”。Vplex试剂盒验证过的样本有血清，EDTA血浆，肝素血浆，柠檬酸盐血浆，尿液，细胞上清液。
如自己采购抗体，开发ELISA方法学，如遇到抗体亲和力低，由于ELISA的两次洗脱将可能将抗体洗掉，大大影响实验结果。MesoScaleDiscovery®可以不用洗，2.5小时完成实验的一步法。
如实验研究周期较长，ELISA试剂盒尽量选择一个批次的，以防止不同批次间的差异。然而由于普通ELISA有效期在3-12个月，而实验周期往往在1-2年以上，一些长期临床实验项目甚至在5-10年，因而经常面临不同批次的挑战。而MesoScaleDiscovery®Vplex试剂盒经过54个月稳定性测试。使用Vplex，完全可以用一个批次支持2-3年的实验。更多细节可以比较下表格：
| MesoScaleDiscovery® 超敏Vplex试剂盒 | 普通ELISA试剂盒 | |
| 试剂盒验证过的样本 | 血清，EDTA血浆，肝素血浆，柠檬酸盐血浆，尿液，细胞上清液 | 血清，EDTA血浆，肝素血浆，细胞上清液 |
| 实验流程 | 可以免洗，无需洗板，2.5小时 | 需要洗2次，6小时以上 |
| 验证 | 灵敏度，准确度精确度，基质效应和不同类型样本，特异性，54个月稳定性测试 | 灵敏度，准确度精确度，基质效应和不同类型样本，特异性 |
| 试剂盒检测稳定性数据 | 54个月稳定性测试，3次冻融测试。 | 无。有效期在3-12个月。 |
| 校正数据 | 使用NIBSC/WHO对照 | 只有高端试剂盒才使用NIBSC/WHO对照 |
| 正常人样本数据检测 | 血清，EDTA血浆，肝素血浆，柠檬酸盐血浆，尿液 | 血清，EDTA血浆，肝素血浆 |
| LPS刺激样本检测 | 全血样本，PBMC（外周血单个核细胞），THP-1（人类单核巨噬细胞） | 无 |
美国MesoScaleDiscovery(MSD)：成立于1995年，在2009年全球首次检测到人携带甲型H1N1病毒，在2013年被评为\"全球前五的免疫分析品牌”。其研发的基于微孔板的电化学发光检测技术（简称：微孔板ECL）是全面升级/替代ELISA，WesternBlot，多蛋白因子检测的第三代免疫分析技术。已经广泛被医药研发中心、药物安全性评价中心、GLP实验室、合同外包企业（CRO）、诊断、生物技术企业应用于药物筛选，动物模型，药物代谢，血药浓度，免疫原性，中和实验，Biomarker筛选，抗体亲和力，疫苗评估，宿主细胞残留，诊断研究。
美国MesoScaleDiscovery(MSD)部分应用方向：
1、细胞因子研究：实现多因子研究，常规灵敏度达0.05pg/ml。符合GLP要求的多因子检测。
2、信号通路研究：可实现同时检测Phospho/Total磷酸化蛋白的研究，仅需4.5小时。
3、神经退行性疾病研究：使用了脑脊液CSF等复杂基质样本检测，无基质效应。
4、药物安全性评估：符合FDA标准的高敏多指标检测。
5、免疫原性评估：可兼容高达50ug/ml高浓度血药干扰，达到
6、抗体亚型分型：快速鉴定样本中不同亚型，可达0.1ng/ml的灵敏度水平
7、抗体表位分析：一次鉴定多达10种不同表位。
8、多价疫苗效价评估：缩短至1.5小时的评估流程。
9、抗体亲和力测试：基于SET方法学的亲和力测定，可分析高达10-15的亲和力样本。
10、中和抗体测定：基于细胞水平，更符合实际生物体要求。
11、细胞水平结合测试：CellBaseBinding测试，多达6log线性范围，能够鉴定细胞表面受体与对应补体结合水平及亲和力
12、生物工艺残留测定：一次检测，可鉴别多种宿主细胞以及纯化工艺中的多种蛋白残留测定，亚纳克基本灵敏度，确保鉴定有效性。
