质量保证

ELISA试剂盒质量好坏依赖于研发过程中对产品的优化与否。为确保高品质及重复性, R D Systems ELISA试剂盒均通过严格的生产和质控标准。Quantikine系列是配套完整试剂，经样本验证和即用型的免疫测定试剂盒，可检测多种复杂样本中的多种分析物。此试剂盒基于双抗体夹心法，利用两种特异性抗体检测同一个分析物。产品在研发过程中经过多步优化过程，来确保产品品质的优异性，无需客户自行优化。这些过程包括:

通过抗体配对优化实验，精心筛选出最佳抗体对 自动化微孔板包被确保高精确度（CV＜10％） 多种因素组合进行交叉反应、干扰实验测试 缓冲液配方的优化降低基质效应和异嗜性抗体干扰 部分试剂盒与NIBSC/WHO的标准作过对比 经验证过的样本均通过性能测试

品质卓越

Quantikine ELISA试剂盒通过严格的性能检测，以满足客户对精确性，特异性，准确度和灵敏度的要求。这些检测包括:

板内和板间准确性 经验证过的样本，如血清、血浆、细胞上清等，均经天然样本分析 血液成分干扰实验 线性分析 回收率分析 试剂及成分稳定性分析 边缘效应及结果漂移分析

经测试过程得到的数据由质量控制部门进行审核，并根据现有的质控标准验证结果是否满足要求。这些质控标准包括：

对照符合既有标准 非特异性结合、标准曲线最低点和最高点信号值符合既有标准 由多个标准曲线空白孔计算得出的灵敏度符合既有标准 经校正的标准品符合既有标准

ELISA精确度和重复性：提供值得信赖的结果

批内和批间结果的重复性是免疫检测实验中衡量精确度的重要标准。精确度发挥其重要作用主要表现在两个方面：1)保证在不同实验批次中所得到的结果的精确性和重复性；2)决定两次试验结果是否有异同。精确度由平行结果的变异系数（CV）来衡量，应主要考量两个方面：批内和批间。批内精确度主要指一次实验内不同孔之间的可重复性，这要求实验者对于同一个样本有几个不同的平行复孔，得到相近的实验结果。批间精确度主要指不同实验间结果的可重复性。批间精确度保证实验者在一段时间内运用不同批次的试剂可得到可重复性的实验结果。R DSystemsQuantikine免疫检测试剂盒保证标准曲线批内和批间CV值不高于10%。低CV值保证实验者得到可重复和可信赖的结果，并且在试验期间内所得到的结果都能保持一致性。

QuantikineELISA试剂盒通过稳定性和重复性检测。A. 三个不同IL-6液度的样本（不同颜色线）用同一批次的人IL-6Quantikine ELISA试剂盒（目录号D6050）分15个月进行检测。B. 三个不同IL-6液度的样本（不同颜色线）用4个不同批次的人IL-6 QuantikineELISA试剂盒（目录号D6050）分12个月检测。

ELISA试剂盒特异性：只检测目标分析物

免疫检测特异性包含抗体交叉反应和干扰效应。交叉反应是指，非目标检测物被抗体对识别而导致结果出现假阳性。干扰效应是指，样本基质中的其他物质可改变抗原-抗体间结合，而阻止目标分析物被检测出来。

高质量抗体选择是保证ELISA试剂盒结果可靠的第一步。抗体对对开发高质量ELISA试剂盒至关重要。R DSystemsELISA试剂盒所挑选的抗体对保证高信号度，低背景和最优的检测灵敏度。抗体均经过特异性，非目标分析物分子间交叉反应和样本基质间干扰测试。

试剂盒经合适的优化和测试，这些问题都可被缓解。假阳性结果可能由样本的基质效应引发的，这些基质效应只有经过多次验证和质控测试才能被确认。这就是为什么一个成功的ELISA试剂盒不能仅仅只通过信号产生与否来评判，而应看信号是否由目标分析物而产生的。这种情况大多数可通过线性稀释实验来进行验证。

Systems通过精心挑选抗体对，优化包被缓冲液、标记抗体缓冲液和实验稀释液来消除基质效应。为检测试剂盒的特异性，会通过检测与目标分析物相近的分子来测试其交叉反应和基质效应。相关的因子列表和实验结果会标识于产品说明书中。

天然蛋白抗原和重组蛋白抗原与捕获抗体结合力的强弱源自于结合后蛋白构象的改变。这些构象的改变可进一步影响检测抗体与蛋白之间的结合。Quantikine试剂盒针对此种情况专门进行了优化，使得无论是天然样本还是重组样本均能被很好的检测并保持一致。

线性稀释可鉴定ELISA假阳性信号。 利用两种TIMP-2ELISA试剂盒检测梯度稀释的细胞培养上清液。利用人TIMP-2 QuantikineELISA试剂盒（目录编号DTM200）检测，回收率均保持在105-108%，保持了很好的线性结果。而使用另外一种ELISA试剂盒时，仅在梯度稀释2倍的时候能够检测出信号，而另外两种稀释度均检测不到结果，说明此试剂盒产生了假阳性结果。ND=不能识别*实验前，样本按照说明书进行稀释。

人TNF-α Quantikine ELISA试剂盒干扰效应检测。不同浓度（125-1000 pg/mL）人TNF-α样本在TNF受体（sTNF RI或sTNFRII）存在或缺少的情况下进行QuantikineELISA试剂盒（目录编号DTA00C）检测。结果表明，即使受体浓度高达1000ng/mL仍不会影响QuantikeELISA试剂盒对TNF-α准确浓度的检测。

Quantikine ELISA可同时检测天然和重组蛋白。包含人激活的TGF-β1的血清样本经梯度稀释后（蓝线）与TGF-β1标准

品（红线）实验结果做比较。结果表明人TGF-β1 QuantikingELISA试剂盒（目录编号DB100B）可同时检测天然和重组蛋白。

ELISA回收率实验

像血浆和血清这种复杂样本基质可能包括影响准确检测目标分析物的干扰因子。回收实验可检测试剂盒是否受干扰因子的影响。低、中和高浓度的分析物被掺入到所有已测定过浓度的验证样本中，进行回收实验测定。回收率以百分比的形式呈现，并标识于产品说明书中。当回收率介于80-120%时，才符合标准，并认为样本中无干扰物质影响实验测定。若发现样本中存在干扰物质时，R DSystems会进行稀释液优化并最大限度消除干扰效应。

Quantikine ELISA试剂盒检测Dkk-1回收率实验。利用 Dkk-1Quantikine ELISA试剂盒（目录编号DKK100）检测Dkk-1掺入回收实验。*实验前，样本按照说明书进行稀释。

ELISA样本：线性稀释

样本经梯度稀释后，终浓度不变，此即为线性分析。若试剂盒无法消除干扰效应，则干扰因子会破坏结果的线性。经验证的样本类型利用试剂盒优化好的实验稀释液进行梯度稀释后，计算样本实验值与预期值的回收率百分比。回收率介于80-120%表明实验结果具有良好的线性。每个产品说明书都标明了所有经验证过样本的分析物平均值和回收率比例。

线性稀释评价基质效应。A.基质中无影响因子存在时，样本线性稀释后得到的实验结果。B.同一实验中，样本基质中存在干扰因子所得到的实验结果。复杂基质中的因子会干扰样本中的目标分析物检测，可通过线性稀释的方法发现干扰效应。

线性稀释实验是检测免疫实验准确度非常重要的方式。A.肝素血浆样本进行掺入回收实验并梯度稀释后，利用两种ELISA试剂盒检测人凝血调节蛋白浓度。使用人凝血调节蛋白/BDCA-3QuantikineELISA试剂盒（目录编号DTHBD0）检测后，回收率为90-110%，表明此实验具有很好的线性值（黄线）。与此相反，利用另外一种ELISA试剂盒，得到的回收率为141-325%（紫红线），表明实验受到了干扰因子的影响而无法得到准确的实验结果。B.肝素血浆样本进行掺入回收实验并梯度稀释后，利用两种ELISA试剂盒检测人组织因子通路抑制因子（TFPI）浓度。使用人TFPIQuantikineELISA试剂盒（目录编号DTFP10）检测的结果回收率在正常的范围内（90-110%；红线），而使用第二种试剂盒检测的结果回收率不达标（80-7%；绿线）。

ELISA灵敏度: 可检测pg/mL级别的蛋白

最小能检测值是区别于空白值所能观测到的最低的统计值。它是通过标准曲线空白点多个复孔的2倍标准差与平均值之和，并按照标准曲线值计算而来。灵敏度越高，可用的动力学范围（标准曲线范围）越宽。R DSystems ELISA试剂盒经过优化可保证高信号强度，低背景和最优的检测灵敏度。

QuantikineELISA试剂盒可检测低浓度的蛋白，检测能力可达到pg/mL，保证蛋白检测的准确性。A.86个健康人的血清样本进行ELISA实验检测，利用人IL-2/IL-23p40 Quantikine ELISA试剂盒（目录编号DP400)。B.41个健康人的血清样本进行ELISA实验检测，利用人IL-6Quantikine HS ELISA试剂盒（目录编号HS600B)。

ELISA试剂盒校准：保证批间一致性

每个Quantikine ELISA试剂盒所包含的标准品都经过高纯度蛋白的校正。R DSystems标准品质量是通过与母校正品进行比较而制定的。这些母校正品是在ELISA试剂盒研发过程中生产的，用于保证不同批次间试剂盒的一致性。所有批次的试剂盒均经过母校正品校对，不会出现任何结果偏差。

由于标准品质量的制定是根据ELISA试剂盒而设定的，所以不同厂商的试剂不能直接用于其他厂商的试剂盒。基于此，R DSystems提供与WHO国际标准进行关联比较后的校正系数。所以客户可根据WHO标准将QuantikineELISA试剂盒与其他ELISA厂商试剂盒所得的实验结果进行比较（若其他厂商也提供了校准系数）。

上海优宁维生物科技股份有限公司

更多内容请关注 优宁维抗体专家

R DSystems ELISAs试剂盒：质量保证，品质卓越（上部）